枪尖精准悬停在无色水相的中央,缓缓吸取了400微升的液体,移入一个全新的无酶离心管中。
全程,江河的手没有一丝颤抖。
外科医生的定力,在这一刻展现得淋漓尽致。
陆晓林在旁边看得头皮发麻。
——哪怕是浸淫实验室多年的老研究员,悬空吸取水相时也难免会有细微的晃动,但江河的手就像是被焊死了一样,稳得可怕。
“加入等体积的异丙醇,陈浩,递冰盒。”
样本在冰上静置了10分钟后,再次放入冷冻离心机。
12000转,10分钟。
再次取出时,管底出现了一点点半透明胶状沉淀。
“rna沉淀出来了。”程溪瑶隔着护目镜,眼睛亮了起来。
江河:“弃上清,加1毫升75的冰乙醇洗涤沉淀。”
轻轻悬浮沉淀后,第三次离心。
7500转,5分钟。
最后,用移液枪极其小心地吸走所有的乙醇液体,将离心管敞口放置在超净台的通风处。
“风干5分钟,不能干透,否则很难溶解。”
五分钟后,江河加入20微升rnase-free的水,轻轻吹打。
“去测浓度。”江河把样本递给陆晓林。
陆晓林拿着样本走到nanodrop分光光度计前,取了一微升滴在检测基座上,放下悬臂。
电脑屏幕上立刻跳出一条曲线。
“浓度120 ng/μl,a260/280比值202。”陆晓林声音迅速,“师弟,提取极其完美!纯度极高,没有蛋白和苯酚污染!”
陈浩几个人长长地松了一口气,互相对视了一眼。
做到了!
江河毫不犹豫,道:“立刻进行逆转录,rna极易降解,必须马上把它变成稳定的cdna。”
“引物用什么?”陆晓林问。
“用随机六聚体引物(rando hexars)做全转录本的逆转录。”
江河走到冰箱前,拿出逆转录试剂盒:“不需要特异性引物,我们在pcr阶段再用甲流通用的ha(血凝素)和na(神经氨酸酶)保守区引物去钓出目标片段。”
看着手里的试剂,江河眼神微动。
其实,如果这真的是一种完全未知的全新病毒,今晚的这几个小时根本连门槛都摸不到。
光是引物设计就能卡死全中国最顶尖的实验室两周时间。
但他不一样。
他记得h1n1的基因图谱,也知道它的外膜蛋白弱点,包括它最容易被哪种引物扩增。
基本就等同于,拿着标准答案,反向推导解题步骤。
所以效率才能这么高。
逆转录反应体系配制完毕。
放入pcr仪。
42c孵育60分钟,70c加热5分钟灭活逆转录酶。
凌晨5:30。
逆转录完成。
极其脆弱的rna终于变成了相对稳定的dna。
“准备pcr扩增反应。”
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